色譜柱清洗的基本原則和一些特殊色譜柱的使用注意事項(xiàng)

基本原則

及時(shí)使用強(qiáng)流動(dòng)相清洗色譜柱，特別是使用等度分析方法或者洗脫強(qiáng)度比較低的分析方法時(shí)，很容易積累強(qiáng)保留的化合物。

a.對(duì)于反相模式（如使用C18柱）：

1).用高比例水相（如80%）沖洗色譜柱5-10個(gè)柱體積，以去除管路和色譜柱中的緩沖鹽（如果體系沒有使用緩沖鹽可以省略這一步）；

2).用高比例有機(jī)相（如80-90甲醇/乙腈等）沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積，必要的時(shí)候，可以使用更強(qiáng)的溶劑（如異丙醇或者含少量THF的異丙醇）清洗，再用推薦保存的流動(dòng)相沖洗后保存。

b. 對(duì)于HILIC模式（如使用Diol柱）：

1).用高比例水相（如50%的水，部分HILIC柱有水相比例的最高限度，需要仔細(xì)閱讀官方說明書）沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積，以去除管路和色譜柱中的緩沖鹽，并清洗色譜柱；

2) .按照推薦保存的流動(dòng)相沖洗后保存。

Comix系列混合模式色譜柱：

對(duì)于含有強(qiáng)堿性基團(tuán)的固定相，如：

必須需要在弱酸性條件下使用和保存，因?yàn)閺?qiáng)堿性基團(tuán)會(huì)在硅膠表面形成強(qiáng)堿性環(huán)境而破壞硅膠基質(zhì)。

對(duì)于含有酸性基團(tuán)的固定相，如：

不可使用甲醇作為有機(jī)相，因?yàn)樗嵝曰鶊F(tuán)與甲醇發(fā)生酯化反應(yīng)而被改性（稀釋劑中的少量甲醇影響可以忽略），特別要注意避免管路殘留的甲醇被沖洗進(jìn)色譜柱。

氨基柱：

1. 水相高的時(shí)候易發(fā)生固定相（氨丙基）水解而發(fā)生柱流失；

2. 氨基身會(huì)電離而產(chǎn)生強(qiáng)堿性環(huán)境而腐蝕硅膠，因此在弱酸性條件下穩(wěn)定性更好；

3. 易與醛類化合物（如還原性糖：葡萄糖等） 、芳香羰基化合物發(fā)生席夫堿反應(yīng)，而死吸附化合物并改性色譜柱，影響重現(xiàn)性：

4. 盡量保存在純有機(jī)相中，以避免發(fā)生水解反應(yīng)和自身電離產(chǎn)生強(qiáng)堿性條件而腐蝕硅膠。